期刊简介

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  • 杂志名称:西部医学杂志
  • 主管单位:川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院
  • 主办单位:四川
  • 国际刊号:1672-3511
  • 国内刊号:51-1654/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:成都市科技优秀期刊期刊收录:统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
西部医学杂志2009年第07期

小鼠β防御素3在大肠杆菌中的融合表达及其抗菌作用的初步研究

江滟;王保宁;杨晓芳;李婉宜;刘冯欢;蒋忠华;李明远

关键词:鼠β防御素3, 原核表达, 融合蛋白, 抗菌作用
摘要:目的 构建小鼠β防御素3(mouse β defensin 3,mBD3)基因的原核表达载体pET-32a(+)/mBD3,诱导mBD3融合蛋白在大肠杆菌中的表达,并融合蛋白的抗菌活性.方法 运用PCR技术从质粒pcDNA3.1(+)/mBD3中扩增mBD3基因片段,将该片段插入pET-32a(+)原核表达载体,并对构建的重组质粒进行PCR、酶切和洲序鉴定.将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌表达菌株Rosetta-gami(2),用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达.采用SDS-PAGE和Western Blot鉴定融合蛋白.通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白,用徽量液体稀释法测定融合蛋白鼠β防御素3(fmBD3)的抗菌活性.结果 mBD3的原棱表达载体pET-32a(+)/mBD3构建成功,在大肠杆菌中表达出fmBD3并提取获得纯化的融合蛋白.fmBD3对单细胞真菌具有较好的抑制和杀灭作用,可抑制革兰阳性菌的生长,而对革兰阴性菌无作用.结论 构建的原核表达载体在大肠杆菌中成功表达fmBD3,该融合蛋白显示出较强的杀真菌作用和一定的抗细菌作用,为进一步研究鼠防御素的抗徽生物活性奠定了实验基础.